In Vivo CAR监测进入新范式，全血检测补齐关键缺口

CAR-T细胞疗法的问世，正在改写肿瘤治疗乃至自身免疫性疾病治疗的版图。然而，无论是当下成熟的ex vivo（体外）CAR-T产品，还是备受瞩目的in vivo（体内）CAR-T新一代疗法，一个关键问题始终贯穿始终：如何在患者的外周血中，精准、高效地监测CAR-T细胞的扩增动态？这不仅关乎药物代谢动力学（PK）/药效学（PD）评价，更直接关系到疗效预测和安全性评估。

长期以来，PBMC（外周血单个核细胞）是CAR-T临床检测中最常用的样本类型。然而，随着精准医学的深化和CAR-T疗法向更多应用场景的拓展，全血检测正凭借更强的生理相关性和操作优势，成为补齐传统方法“关键缺口”的新一代解决方案。ACROBiosystems百普赛斯在CD19 CAR检测体系中率先开展系统性验证：构建spike-in全血模型，并提供经过验证的荧光标记CD19蛋白及抗FMC63抗体等工具，为行业从PBMC向全血检测的范式转变提供坚实的数据支撑和可靠的工具选择。

PBMC检测之所以能够成为CAR-T监测的主流手段，并非偶然。一方面，PBMC可通过外周血反复采集，样本可及性强；另一方面，结合流式细胞术与PCR类方法（qPCR/ddPCR），研究人员可以有效评估CAR-T细胞的丰度与功能，为CAR-T疗法的PK/PD研究提供重要的数据支撑。

然而，随着CAR-T疗法进入更广泛和深入的应用，PBMC监测方法的局限性逐渐显露：

① 步骤繁琐，存在样本偏差风险

传统的PBMC检测，意味着红细胞裂解、多轮离心、细胞重悬……这一系列复杂的样品前处理步骤，不仅耗费大量时间，更关键的是，每一步都可能对细胞状态带来影响，甚至可能选择性丢失部分亚型的T细胞，最终导致检测结果无法完整体现体内的真实情况。

② 生理相关性降低

经过复杂的PBMC分离之后，细胞实际上已经脱离了原始的全血微环境。对于关注CAR-T细胞“体内”真实生物学行为的研究者来说，更多地希望能在保持其生理状态的条件下完成检测。

③ 无法满足in vivo疗法的动态追踪需求

特别是随着In Vivo CAR-T技术的快速发展，业界迫切需要一种操作更简便、反应更灵敏、且能支持长期反复从同一患者采血的高通量监测方法。显然，传统PBMC方法在这一点上显得有些捉襟见肘。

那么，如果直接在未经处理的全血中检测CAR-T细胞，会怎样？过去，由于全血中红细胞和高背景干扰严重，这曾是行业公认的技术壁垒。但近期ACROBiosystems百普赛斯发表的数据表明，这一切正在发生改变。

研究发现，在20% CAR-T细胞spike-in的全血模型中，三种检测试剂——包括PE标记的CD19蛋白、PE标记的抗FMC63鼠单抗及兔单抗——均能准确检测出CAR-T细胞的阳性比例，且检测结果与理论spike-in比例高度一致。

这标志着全血检测不仅在定性上可行，在准确定量上也展现出良好的可行性。

相比于传统的PBMC流程，全血检测展现出多维度的竞争性优势：

① 高信噪比：全血中CAR-T细胞清晰可辨

通过特异性抗体或CAR靶向抗原标记，全血中CAR阳性与阴性细胞群体清晰可分；阴性对照无非特异背景，高信噪比为准确定量提供了可靠保障。

② 无损式监测：提升数据准确性与一致性

全血检测避免了PBMC分离步骤及其对T细胞适应性的影响。省去多步样本处理，不仅节约了时间，更重要的是杜绝了因实验操作差异导致的数据偏差。

③ 灵活应对多场景

无论是针对需要红细胞裂解的样品，还是不进行裂解直接上样的全血样品，检测结果均表现出良好的一致性。这意味着这些检测方案具有极高的普适性，能够满足临床检测、临床前研究及药企大样本筛选等不同场景的实际需求。

在CAR-T疗法中（包括ex vivo和in vivo），能够快速、准确地在全血中检测到CAR阳性细胞的比例，对于监测CAR-T细胞在体内的扩增、持续性和功能持久性至关重要。近年来，随着流式细胞技术和多重荧光标记的飞跃发展，研究人员可以在微量全血样本中一次性捕获多个表型与功能维度数据。

而诸如全血检测这类技术的突破，一方面极大地解放了实验人员的生产力，另一方面为临床大样本量和高时间点的精准监测铺平了道路。

流式细胞术是CAR-T监测的核心技术。当前，ACROBiosystems百普赛斯的全血CAR检测方案在无需裂解红细胞的全血模型中已证实可行。

准确检测CAR-T细胞的阳性比例，是体内监测的基本前提。以CD19这一最广泛应用的CAR-T靶点为例，ACROBiosystems百普赛斯通过构建20% CAR-T细胞spike-in的全血模型，系统评估了CD19蛋白（Cat. No.CD9-HP2H3）及抗FMC63抗体（Cat. No. FM3-HPY53和FM3-PFM721）在全血环境中的检测表现。

数据显示，通过Fc受体封闭后，无论是在未经处理的全血样本中，还是在经过红细胞裂解的样本中，三种检测试剂所测得的CAR阳性细胞比例均与理论添加比例（20%）高度吻合，未见明显偏差或非特异性背景信号。

这一结果初步证实，在全血样本中直接检测CAR-T细胞是准确可行的，检测结果能够忠实反映样本中的真实阳性率。

After Fc receptor blockade, whole blood only control (Figure A) and whole blood spiked with CAR-T cells (Figure B) were first stained with PE-Labeled Human CD19 (20-291) Protein, His Tag (Cat. NO. CD9-HP2H3), and then stained with 7-AAD. After 100-fold dilution, acquire data using a CytoFLEX S and then analyze the data with FlowJo. CAR-T cells were identified as PE-positive events within the live CD45+CD3+ (or CD45+) lymphocyte population. The proportion of CD45+CAR+ cells is around 20%, which is largely consistent with the theoretical spike-in value.

After Fc receptor blockade, whole blood only control (Figure A) and whole blood spiked with CAR-T cells (Figure B) were first stained with PE-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (Site-specific conjugation) (Preservative free) (Cat. No. FM3-HPY53) , and then stained with 7-AAD. After 100-fold dilution, acquire data using a CytoFLEX S and then analyze the data with FlowJo. CAR-T cells were identified as PE-positive events within the live CD45+CD3+ (or CD45+) lymphocyte population. The proportion of CD45+CAR+ cells is around 20%, which is largely consistent with the theoretical spike-in value.

After Fc receptor blockade, whole blood only control (Figure A) and whole blood spiked with CAR-T cells (Figure B) were first stained with PE-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Rabbit IgG (1G10) (Cat. NO. FM3-PFM721), and then stained with 7-AAD. After 100-fold dilution, acquire data using a CytoFLEX S and then analyze the data with FlowJo. CAR-T cells were identified as PE-positive events within the live CD45+CD3+ (or CD45+) lymphocyte population. The proportion of CD45+CAR+ cells is around 20%, which is largely consistent with the theoretical spike-in value.

随着全血CAR-T监测方案的逐步成熟，其应用场景正在迅速铺开。ACROBiosystems百普赛斯的验证数据也进一步证明，基于全血的检测平台能够同时支持ex vivo产品和in vivo产品的CAR阳性率评估和体内药代监测需求。

以下两个场景值得关注：

场景一：In Vivo CAR-T研发与疗效评价

对于希望摆脱体外细胞培养、直接在体内诱导T细胞表达CAR的新兴疗法而言，全血检测是目前唯-一的高通量、低成本动态追踪方案，能够帮助决策团队在动物模型阶段快速筛选出最优in vivo递送策略。

场景二：临床大样本量筛查与多中心试验

在大规模临床试验中，由于不同实验室的操作差异性极易影响PBMC检测结果的基线一致性。而标准化的全血检测方案则提供了统一的实验窗口，有效降低临床中的批间差和操作误差。

从ex vivo（体外）到in vivo（体内），CAR-T疗法的技术迭代正在重塑整个行业的检测思维。当检测对象从经过多步处理的PBMC走向原始状态下的全血，我们看到的不仅是实验流程的精简，更是检测数据准确性和体内生理相关性的巨大跨越。

与传统方法相比，全血检测的核心优势在于——流程极简、数据保真、体内适用——而这，正是In Vivo CAR时代最宝贵的检测特征。ACROBiosystems百普赛斯率先在这一方向上进行系统性验证，通过构建spike-in全血模型、提供经过验证的CD19蛋白及抗FMC63抗体工具，为行业从PBMC向全血检测的范式转变提供了坚实的数据支撑和可靠的工具选择。

可以预见，全血检测正在成为行业新标准，助力精准CAR-T监测的高效升级。对于制药企业、CRO和临床研究机构而言，率先拥抱这一变革，就是在为未来更精准、更高效的CAR-T疗法研发抢占先机。作为这一进程的积极推动者，ACROBiosystems百普赛斯将持续为行业提供验证数据和创新工具，与广大研究者共同迎接In Vivo CAR监测的新时代。

这场从PBMC到全血的无声革命已拉开序幕，而它的最终目标，仍是让每一款CAR-T产品都能在临床实践中跑得更精准。