【全新上线】细胞免疫评价利器——ELISpot分析检测服务

822 人阅读发布时间：2023-06-15 10:58

什么是ELISpot？

酶联免疫斑点技术（Enzyme Linked Immunospot Assay，ELISpot）是细胞免疫学中最灵敏的检测方法之一，可以在单细胞水平下完成对抗体分泌细胞（B细胞）及细胞因子分泌细胞（T细胞）的检测，能从20万-30万细胞中筛选出1个分泌相应蛋白的细胞。ELISpot的实验原理也是基于抗原抗体反应，是双抗夹心ELISA的延伸和新的发展，可以看作单细胞水平的ELISA。ELISpot能够对抗原刺激后的活细胞进行功能性检测，具有较髙的特异性、直观且可信度髙等优点。

ELISpot原理

免疫细胞在刺激物存在的条件下被激活，其分泌的细胞因子/免疫球蛋白被ELISPOT板底PVDF膜上（预包板）的特异性单抗捕获，去除细胞后，被捕获的细胞因子与生物素标记的单抗结合，其后二者再与碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶标记的亲和素结合，加入底物显色后，PVDF膜上出现紫色或红褐色的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过酶联免疫斑点分析仪（ELISPOT Reader）对斑点进行自动计数和分析。

ELISpot应用

疫苗评价的“金标准”

国家药监局药品审评中心（CDE）早在2003年发布的《预防用DNA疫苗临床前研究技术指导原则》中就推荐ELISpot作为评价细胞免疫效价的方法，ELISpot是检测和评价疫苗引起细胞免疫效应的标准工具，目前广泛应用于感染性疫苗、肿瘤疫苗的临床阶段的药效学评估。新冠疫情爆发后，在2020年CDE新发布的《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则（试行）》中也推ELISpot技术作为检测评价mRNA疫苗细胞免疫反应的方法。

CGT领域的“好助手”

ELISpot除了应用在疫苗研究，还应用在免疫原性检测、药物筛选等领域。免疫原性是影响CAR-T细胞扩增存续的关键因素，也是影响基因治疗产品安全性的重要因素，ELISPOT技术通过对免疫原性检测来评估临床阶段细胞基因治疗产品安全性和有效性。