Battles, M. B., & McLellan, J. S. (2019). Respiratory syncytial virus entry and how to block it. Nature Reviews

① 第一步：RSV的G蛋白与宿主细胞跨膜蛋白表面的糖胺聚糖（GAGs），CXC₃R1受体或TLR4结合使RSV黏附在宿主细胞表面。

② 第二步：RSV融合前糖蛋白F与膜受体（类胰岛素生长因子1，IGF1R）结合，IGF1R在与RSV结合以后，触发蛋白激酶C-ζ（PKC-zeta）激活，共同产生信号，这种细胞信号级联反应将核仁素招募到细胞表面，从而与RSV-F结合。

③ 第三步：RSV-F在质膜启动融合，并将其基因组直接释放到细胞内。

 

病毒样颗粒（Virus-likeParticles，VLP）是由病毒的单个或多个结构蛋白自我组装形成的高度结构化蛋白颗粒。由于不含有病毒的遗传物质，VLP不能自主复制，不具备传染性，安全性较高。VLP表达系统选取多样(细菌、酵母、昆虫或哺乳动物细胞)，制备成本低，可大规模生产。迄今为止，已经开发了各种基于VLP的候选疫苗例如HPV，HBV，Influenza virus等，被归为亚单位疫苗的VLP疫苗被细分为包膜和非包膜亚型，它能够引发抗体和细胞介导的免疫反应。

 

The Respiratory Syncytial Virus (RSV) G Protein Enhances the Immune Responses to the RSV F Protein in an Enveloped Virus-Like Particle Vaccine Candidate

呼吸道合胞病毒G蛋白在病毒样颗粒候选疫苗中增强对RSV F蛋白的免疫应答

研究人员通过在棉鼠模型中对仅由F蛋白（F/F VLPs）、仅由G蛋白（H/G VLPs）和同时含有两种蛋白（F/F+H/G VLPs）组装的三种病毒样颗粒（VLP）进行研究，结果如下：

✔ 结果：

VLPs的RSV F和G蛋白含量

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抗F蛋白单克隆抗体与仅由F或同时由F和G蛋白组装的VLPs的结合情况

✔ 结论：所有VLP均结合抗F蛋白单克隆抗体，VLP中G蛋白能够增加F蛋白其与抗F蛋白单克隆抗体的结合能力（图A/B/C/D/F）。

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抗G蛋白单克隆抗体对仅由G或同时由F和G蛋白组装的VLPs的结合情况

✔ 结论: VLP 中F蛋白的存在不会影响 G 蛋白其与抗 G 蛋白单克隆抗体的结合能力。

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免疫棉鼠血清总抗Pre-F IgG

✔ 结论：仅含G蛋白的VLPs免疫动物血清中的抗体水平与由F和G蛋白组装的VLPs诱导的水平无显著差异。

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棉鼠血清中和效价评估

✔ 结论：同时含有G蛋白和F蛋白的VLP免疫动物血清中诱导的NAb水平显著高于仅由F蛋白和仅由G蛋白组装的VLP。

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病毒空斑实验：攻毒动物肺和鼻组织的病毒水平

✔ 结论：对上呼吸道感染的保护作用弱于对肺部的保护作用，由F和G蛋白组装的VLPs免疫效果优于H/G VLPs和F/F VLPs。

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动物血清抗F抗体的特异性

✔ 结论：VLP中G蛋白的存在影响了棉鼠诱导的抗F抗体的特异性。

✔ 总结：在棉鼠模型中，候选疫苗同时包含F和G蛋白，能够诱导更高的Nab滴度。

 

 

✦ 特殊设计的天然构象：天然三聚体构象的融合前Pre-F蛋白、融合后Post-F蛋白以及G蛋白；

✦ 产品类型丰富：覆盖正确构象的RSV Pre-F、Post-F和G蛋白、RSV-F0广谱抗体和Pre-F0特异性抗体、Pre-F0抗原及抗体检测试剂盒；

✦ 高纯度：经SDS-PAGE及SEC-MALS验证纯度>90%；

✦ 高活性：经ELISA验证Pre-F及Post-F蛋白与其特异性抗体结合能力强；

✦ 高免疫原性：天然构象RSV-F和G蛋白可诱导产生更高的抗体滴度。
 

抗原蛋白

◎ 纯度SEC-MALS

The purity of HRSV (A) Fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H7) is more than 90% and the molecular weight of this protein is around 175-200 kDa verified by SEC-MALS.

◎ 活性ELISA

Immobilized HRSV (A) Pre-fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H7) at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Human IgG1 (12C6) (Cat. No. RS0-S286)/Anti-Fusion glycoprotein F0 Antibody, Human IgG1 (D25) with a linear range of 0.1-2 ng/mL. HRSV (A) Post-fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H6) is verified not recoginized by Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Human IgG1 (12C6) (Cat. No. RS0-S286)/Anti-Fusion glycoprotein F0 Antibody, Human IgG1 (D25) in low concentration (Routinely tested).

ELISA检测试剂盒：

RSV-Pre-F0抗原检测试剂盒相关验证数据

对（RAS-A163）试剂盒基质效应、灵敏度及线性、选择性、稀释线性、精密度、 准确度、重现性和耐用性进行了方法验证。

◎ 灵敏度及线性

Immobilized Anti-Pre-Fusion glycoprotein F0 (RSV) Antibody can bind Pre-Fusion glycoprotein F0 (RSV). Detection was performed using HRP-Anti-Pre-Fusion glycoprotein F0 (RSV) Antibody with sensitivity of 3.1 ng/mL (QC tested).

◎ 基质效应

将不同浓度标准品加入50%1640和50%DMEM培养基中，与加入不含培养基(0.5%BSA)进行对比，RSD（OD 值)＜10%，建议样本MRD=1:2。

◎ 稀释线性

将高浓度的标准品加入到1640和DMEM培养基中，进行梯度稀释，在不同稀释比例下的回收率均在 80-120%范围内。

◎ 准确度

设置四个质控点浓度，每个质控点浓度重复20遍，回收率均在80-120%范围内。

◎ 精密度

板内精密度：4个已知浓度的样本酶标板内重复测试20次，以评估酶标板内的精密度。

板间精密度：4个已知浓度的样本酶标板间重复测试3次，以评估酶标板间的精密度。

经验证该项目的批内变异系数（CV＜10%）/批间变异系数（CV＜10%），均满足试剂盒申明的标准范围，能够满足实验室要求，可用于日常项目检测使用。

RSV-Pre-F0 IgG抗体检测试剂盒相关验证数据

对（RAS-T161）试剂盒MRD、cutoff值、专属性、线性及线性范围、精密度和准确度、耐用性进行了方法验证。

◎ 精密度

批内精密度：7个样本批内重复测试10次，以评估批内的精密度。

批间精密度：7个样本批间重复测试3次，以评估批间的精密度。

经验证该项目的批内变异系数（CV＜10%）/批间变异系数（CV＜10%），均满足试剂盒申明的标准范围，能够满足实验室要求，可用于日常项目检测使用。

◎ 准确度

设置三个质控点浓度，每个质控点浓度重复10次，回收率均在80-120%范围内。

◎ 典型数据

 

 

 

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