从受体结合到细胞功能：一本手册理清Fc评价路径

Fc功能评价涉及受体结合、结合动力学、效应功能及种属差异等多个维度。不同研发阶段和研究目的，对评价深度的要求也有所不同。手册按常见研发场景梳理了相应的评价重点和方法选择：

Fc功能评价在抗体研发各阶段的典型应用

面对不同的Fc功能评价需求，并不存在一种方法能够回答所有问题。

从精细的分子互作分析，到多候选分子的快速筛选，再到细胞水平的功能响应评价，不同技术平台提供的是相互补充的证据维度。手册进一步梳理了不同研发场景对应的平台选择，方便研发人员根据具体问题快速匹配合适的方法。

不同Fc功能评价需求对应的检测平台

SPR/BLI可用于分析候选分子与Fc受体的亲和力及结合动力学，获得KD、kon、koff等动力学参数。通过这些数据，可以更具体地比较候选分子与不同Fc受体或不同物种受体之间的结合差异。

以Human CD16a（V176）Protein（Cat. No. CD8-H52H4）与anti-HER2 IgG1抗体的结合分析为例，在所示实验条件下，SPR和BLI测得的亲和力分别为0.441 μM和0.447 μM，两种方法获得了接近的结果。

Immobilized Human CD16a (V176), His Tag (Cat. No. CD8-H52H4) on CM5 Chip via anti-His antibody, can bind Monoclonal Anti-Her2 Antibody, Human IgG1 (Cat. No. HE2-M598) with an affinity constant of 0.441μM as determined in SPR assay (Biacore T200) (QC tested).	Loaded Human CD16a (V176), His Tag (Cat. No. CD8-H52H4) on HIS1K Biosensor, can bind Herceptin with an affinity constant of 0.447 μM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e) (Routinely tested).

在先导筛选和候选优化阶段，往往需要在较短时间内完成多个候选分子的比较和排序。TR-FRET平台采用均相、免洗的检测形式，更适合多样品平行检测，可用于比较候选分子的相对结合活性。

使用Human CD16a（V176）Binding Kit（TR-FRET，Cat. No. FRT-07），在同一实验中平行比较多种已获批抗体及Fc类生物制剂的相对结合活性。

This kit (Cat. No. FRT-07) was used to evaluate four FDA-approved antibody drugs with different affinities for human CD16a (V176). Bevacizumab and Efgartigimod alfa bind to human CD16a (V176) with high affinity. Toripalimab shows no binding to this receptor. The Fc region of Eculizumab has been modified into the human IgG2 hinge region and the human IgG4 CH2-CH3 region, so it doesn’t bind to human CD16a (V176).

受体结合回答的是“能不能结合、结合得怎么样”，而对于ADCC、ADCP等效应功能研究，还需要进一步回答：这种结合差异，能否转化为细胞水平的功能响应？

报告基因细胞体系可以将FcγR激活转化为可定量的信号，用于比较不同抗体或不同受体背景下的功能响应差异。

以ADCC评价为例，将同一抗体分别置于CD16a 158V与158F报告基因细胞株中检测，即可比较不同等位基因背景下的功能响应，为Fc工程化方向提供功能层面的依据。

ADCC response to anti-human CD20 antibody (FOLD). Anti-human CD20 antibody-induced ADCC activity was evaluated using Human CD16a (158V) (Luc) Jurkat Reporter Cell (Cat. No. SCJUR-STF067) in the presence of Raji cells that express CD20 endogenously. The max induction fold was approximately 854.	ADCC response to anti-human CD20 antibody (FOLD). Anti-human CD20 antibody-induced ADCC activity was evaluated using Human CD16a (158F) (Luc) Jurkat Reporter Cell (Cat. No. SCJUR-STF068) in the presence of Raji cells that express CD20 endogenously. The max induction fold was approximately 275.

Rituximab在CD16a 158V和158F报告基因细胞株^{IP Friendly}中的信号响应

需要注意的是，报告基因结果反映的是特定实验体系下的FcγR信号激活，并不直接等同于原代NK细胞杀伤或巨噬细胞吞噬等生物学效应。