全球发售——GMP级别重组DLL4蛋白

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ACROBiosystems百普赛斯致力于开发高质量的、应用于CGT临床阶段的相关试剂/原料，基于完善的GMP质量管理体系，现全新推出GMP级别重组DLL4蛋白（货号：GMP-DL4H28），具有高活性、高安全性等，可用于Feeder-cell free培养方案下的iPSC-T细胞诱导分化过程中，更好支持iPSC大规模临床生产。

CAR-T为代表的细胞免疫疗法，已在多种血液恶性肿瘤的治疗中表现出优秀的临床效果，目前已有多款CAR-T药物获批上市，其中，T淋巴细胞是细胞免疫疗法药物开发的关键介质，然而主流的自体细胞疗法存在一些明显的关键性障碍，如T细胞不易获取（淋巴细胞减少症患者）、大规模制造困难以及无法通用性治疗等问题，因此，获取足够数量的T细胞用于临床生产至关重要。为克服这一挑战，相关研究发现，可通过多种细胞类型来衍生获取T细胞，如脐带血（UCB）造血干细胞、骨髓（BM）造血干细胞、胚胎干细胞(ESC)、诱导多能干细胞（iPSC）等来源，其中，iPSCs因其独特的自我更新特性以及被基因工程编辑的能力，有潜力提供T细胞的可再生来源，为细胞治疗提供“无限供应”的平台。

Simplified in vitro differentiation schema describing the approximate time needed to generate mature SP T cells from four starting progenitor cell populations. Stem Cells. 2015;33(11):3174-3180.

DLL4在iPSC- T诱导分化中的关键作用

经典的iPSC来源T细胞分化方案是将来自健康供体的iPSCs与小鼠骨髓基质细胞系OP9共培养，以产生CD34+的造血祖细胞，然后被富集后与特定生长因子（如SCF、Flt3、IL-7、IL-3、TPO）和过表达DLL1或DLL4的OP9细胞系共培养，启动T细胞分化，最终得到iPSC诱导分化的T细胞。

Generation of iPSC-derived T cell-based cell therapy. Cancers (Basel). 2022;14(9):2266

我们不难注意到DLL4/DLL1在整个分化过程中起到了关键作用，这主要是因为T细胞分化依赖Notch信号通路来完成。实际上，Notch受体-配体相互作用决定了多个细胞谱系的发育过程，尤其在T淋巴细胞生成过程中，几乎完全是由 Notch1 和 Delta 样 (DLL)4相互作用来介导，在上述iPSC诱导分化培养过程中，HPC上表达的受体 Notch1与OP9-DL细胞上表达的DLL4/DLL1相互作用，从而诱导一系列T细胞谱系分化步骤。

No T cells, but aberrant B cell accumulation, in the thymus with Dll4-null epithelial cells，J Exp Med. 2008;205(11):2507-2513.

不过在体外培养时，DLL4 和DLL1 均显示支持 T 淋巴细胞生成, 为了确定哪种 DLL在体外诱导造血祖细胞产生T谱系细胞方面更有效，有研究团队做了更深入研究，他们制备了一系列表达水平(lo/med/hi)的DLL4和DLL1的OP9 细胞，用于HPC向T细胞的诱导分化中，结果显示，尽管 OP9-DL4hi和OP9-DL4med 细胞上的Dll4-HA的细胞表面蛋白水平分别低于OP9-DL1hi和OP9-DL1med上的 DLL11-HA 水平，但表达DLL4 的细胞能更有效地支持T细胞生成，这表明DLL4在HPC向T淋巴细胞诱导方面比DLL1更有效。

Comparison of T cell development from HPCs cultured with OP9-DL1 (lo/med/hi) and OP9-DL4 (lo/med/hi) cell lines. J Immunol. 2010;185(2):867-876.

所以，OP9-DL是iPSC-T诱导分化中必不可缺的材料，但使用鼠源基质细胞系及一些未定义的某些提取物会导致安全性问题而被限制临床应用，目前，基于重组DLL4蛋白的Feeder-cell free培养已成为临床iPSC规模化生产的主流方案，如使用板子结合Notch配体DLL4和一些粘附分子（如VCAM-1），具有更好的临床转化潜力，更有研究团队考虑到板结合的方法受到组织培养板表面积的限制，认为这依旧对大规模生产提出了挑战，开发出基于DLL4微珠的Feeder-cell free体外系统，来更好支持iPSC大规模悬浮培养。

T cell development from human pluripotent stem cells using DLL4-μbeads, Nat Commun. 2021;12(1):5023.

总结

iPSC-T细胞作为“现货型”的T细胞来源，可用作下游如CAR转导、TCR工程化构建修饰等生产中，有研究显示，基于Feeder-cell free条件，能达到1L约2 × 10¹⁰个的iT细胞培养水平，这个数字足以进行安全性评估的初步临床试验，且相比于自体T细胞，更有解决同种异体细胞治疗引起的免疫排斥反应的优势，iPSC-T细胞或将成为T细胞免疫疗法的理想通用细胞源。iPSC诱导分化对T细胞的体外规模化生产和持续进步产生了巨大的影响，随着对其质量控制和诱导分化工艺的不断优化，iPSC有望在免疫疗法领域释放巨大潜力。

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