【新品上线】通用型CAR阳性率检测工具——抗G4S Linker流式抗体

随着基因工程技术在肿瘤治疗应用中的快速发展，以CAR-T为代表的免疫细胞疗法已在白血病、淋巴瘤等血液肿瘤患者治疗中展现出显著的临床效果。实际上，“CAR”是影响CAR细胞疗法有效性的关键，相关法规文件明确要求CAR表达阳性率检测是药物质控的重要指标之一。CAR检测几乎贯穿CAR细胞药物的整个开发周期：如早期研发CAR的表达确认、CMC质控阶段CAR细胞阳性率质控、临床阶段CAR药物的PK研究等，因此，选择合适的CAR表达检测试剂对于药物的成功开发至关重要。

目前，市面上已有多种CAR检测试剂/工具，它们大多数是基于CAR的不同结构区域而设计开发，有针对CAR抗原结合位点的，比如抗原蛋白和抗独特型抗体；或针对通用domain的，比如结合κ轻链Protein L蛋白，结合Fab的抗Fab抗体，针对CAR Linker的抗CAR Linker 抗体等。整体来看，这些CAR阳性率检测试剂均有各自的优劣势，可根据实际应用需求来选择。

Comparison of the Pros and Cons of CAR Detection Reagents. Front Immunol. 2020;11:1770.

◎ CAR结构展示

整个CAR分子是模块化的合成受体，主要由4个部分组成：细胞外靶抗原结合结构域、铰链区域、跨膜结构域、一个或多个细胞内信号结构域。其中，细胞外靶抗原结合结构域，赋予了CAR细胞对特定抗原的识别能力，也是CAR阳性率检测时常用的结合区域，该结构由单克隆抗体的可变重链（variable heavy, VH）和可变轻链（variable heavy, VL）组成，并由一个灵活的连接器Linker连接，形成单链可变片段（single-chain variable fragment, scFv），特异性地结合肿瘤细胞表面的抗原。

Structure of chimeric antigen receptors (CARs) incorporated in the membrane of a T cell. Source: Jayapriya et al. EBioMedicine. 2020.

在此基础上，我们为更好满足市场需求，现全新推出一款通用型CAR检测工具——Anti G4S Linker Antibody，包括APC荧光标记、PE荧光标记、非标记等多种产品形式，经FACS流式验证，可高特异、高灵敏结合G4S Linker CAR细胞，具有高普适性，全面助力细胞疗法药物的开发进程。

◎ 关于G4S Linker：

是一种抗体表达和设计使用最为广泛的柔性氨基酸链，序列为(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n。可通过重复次数“n”，来优化GS氨基酸链的长度，以实现抗体或蛋白功能域的适当分隔，或维持必要的区域间相互作用。目前，多种CAR的构建体分别利用了(Gly4Ser)3或(Gly4Ser)4氨基酸链，这也是普遍认为的最佳氨基酸链长度：15-20个氨基酸的范围。

✎ 普适性好：可特异性结合具有G4S Linker设计的CAR细胞；

✎ 高灵敏度和高特异性：经类CAR细胞批检放行；

✎ 极低非特异信号：经PBMC双染验证；

✎ 高稳定性：重构后在2-8℃条件下可以稳定保存1年。

✔ 经流式验证，APC荧光标记抗4GS Linker抗体可高特异与Anti-MSLN (G4S)4 类CAR细胞结合。

5e5 of Anti-MSLN CAR-293 were stained with 100 μL of working solutions of APC-Labeled Monoclonal Anti-G4S linker Antibody, Mouse IgG1 (163) (Site-specific conjugation)(Cat. No. G4S-AFM664) and isotype control antibody respectively, washed analyzed with FACS. APC signal was used to evaluate the binding activity (QC tested).

✔ 经流式验证，APC荧光标记抗4GS Linker抗体可高特异与Anti-CD19 (G4S)3 类CAR细胞结合。

5e5 of Anti-CD19 CAR-293 were stained with 100 μL of working solutions of APC-Labeled Monoclonal Anti-G4S linker Antibody, Mouse IgG1 (163) (Site-specific conjugation)(Cat. No. G4S-AFM664) and isotype control antibody respectively, washed analyzed with FACS. APC signal was used to evaluate the binding activity(QC tested).

✔ 极低非特异：APC荧光标记抗4GS Linker抗体经与未转染CAR的PBMC细胞流式验证，无非特异背景问题。

5e5 of non-transduced PBMCs were stained with APC-Labeled Monoclonal Anti-G4S linker Antibody, Mouse IgG1 (163) (Site-specific conjugation)(Cat. No. G4S-AFM664) and isotype control antibody respectively, washed analyzed with FACS. APC signal was used to evaluate the non-specific binding activity to non-transduced PBMCs.

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