从工艺开发到CMC质控：RDC IRF检测如何更高效

IRF检测贯穿RDC药物从工艺开发到制剂放行的多个关键环节，可用于评价不同工艺条件或储存条件对RDC靶点结合能力的影响。

图1：IRF检测在RDC工艺开发与CMC质量控制中的应用

目前，RDC领域常用的IRF检测方法包括Lindmo外推法、细胞饱和法及磁珠抗原法。三种方法检测原理及适用场景有所不同。

Lindmo线性外推法和细胞饱和法均以靶点阳性细胞作为抗原来源，能够提供更接近天然膜环境的抗原呈递形式，在新型RDC表征及细胞水平结果确认中具有重要价值。

磁珠抗原法通过将靶点蛋白固定于超顺磁性磁珠表面，构建无细胞抗原捕获体系，使放射性标记RDC在体外与靶点直接发生特异性结合反应。随后通过磁分离去除未结合分子，并对结合部分进行放射性计数，从而计算IRF值。

图2：不同IRF检测方法比较

尽管Lindmo法是目前广泛采用的IRF评价方法之一，但在工艺开发与CMC质控中仍存在一定限制：

在RDC工艺开发与CMC质控过程中，研发人员通常需要一种快速、稳定、可标准化的IRF检测方法，以支持高频筛选与过程控制需求。

磁珠法通过将靶点蛋白固定于超顺磁性磁珠表面，构建无细胞抗原捕获体系，使RDC与靶抗原直接发生特异性结合反应。随后通过磁分离去除未结合分子，并进行放射性计数计算IRF。与细胞法相比，该方法无需细胞培养，可减少细胞状态带来的实验波动，实验流程更简单，检测周期显著缩短。

磁珠法并非替代Lindmo法，而是作为其补充，为工艺开发、分析方法开发及CMC质量控制提供更快速、更易标准化的IRF检测方案。

自行建立磁珠法通常还需要筛选重组靶点蛋白、选择偶联方式并优化蛋白负载量。不同批次的蛋白偶联效率和磁珠表面抗原密度也可能成为新的方法变量。

针对RDC IRF检测需求，ACROBiosystems百普赛斯开发了预偶联蛋白磁珠。采用生物素化重组靶点蛋白，通过生物素—链霉亲和素体系固定于超顺磁性磁珠表面，构建即用型Cell-free IRF检测体系。使用时无需自行开展蛋白偶联及偶联条件优化，可直接进行RDC捕获、磁分离和放射性计数，减少方法搭建过程中的操作步骤与额外变量。

图3：预偶联靶点蛋白磁珠检测RDC IRF的5步流程

需要注意的是，蛋白预偶联磁珠省去了蛋白偶联步骤，但不能替代针对具体RDC、靶点及核素体系开展的方法适用性评价和方法学验证。

• TROP-2预偶联磁珠加速稳定性验证

现有验证数据显示，37°C加速放置7天后，磁珠与anti-TROP-2 mAb的结合活性保持稳定。

Accelerated stability test. After placing the lyophilized beads at 37°C for 7 days, binding activity between the Human TROP-2-coupled Magnetic Beads (Cat.No. MBS-K028) and anti-trop-2 mAb showed little deviation from the unaccelerated sample (%RSD<10%). Data were measured on day 0, 3, 7 respectively.

如果现有产品未覆盖您的靶点需求，ACROBiosystems百普赛斯可提供定制化预偶联磁珠开发服务，帮助您快速建立适用于RDC IRF检测的Cell-free分析体系。欢迎扫码咨询~

参考文献

1. Delaney S, et al. MIB Guides: Measuring the Immunoreactivity of Radioimmunoconjugates. Molecular Imaging and Biology. 2024;26:213–221.

2. Sharma SK, et al. A Rapid Bead-Based Radioligand Binding Assay for the Determination of Target-Binding Fraction and Quality Control of Radiopharmaceuticals. Nuclear Medicine and Biology. 2019;71:32–38.

3. ACROBiosystems Internal Data, 2026.