任何组织的切片，如果不进行染色就看不到组织的细微结构、看不到细胞核，无法分辨出肿瘤的良恶性，不能向临床医生提供诊断依据。所以染色在病理组织形态学的诊断、科研和教学工作中具有重要的实用价值。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。

 

苏木1精-伊红染色法 (hematoxylin-eosin staining)，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木1精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

   

• - 二甲1苯

• - 梯度乙醇

• - 苏木素染液

• - 伊红染液

• - 分化液

• - 返蓝液

• - 中性树胶固封剂

 

1. 1. 脱蜡要彻底。一般脱蜡彻底的切片呈透明状，脱蜡的彻底与否取决于环境温度、脱蜡液温度、脱蜡时间、切片数量等；

2. 2. HE各染液的染色时间应根据组织类型不同、样本新旧、固定不同、环境温度不同、染液使用情况不同、切片厚度及切片数量来调整。一般来说新鲜组织易着色，陈旧组织较难着色；

3. 3. 染色过程中水洗需注意自来水的酸碱性。如自来水呈酸性，则易使苏木素脱色，如自来水呈碱性，则易加快水溶伊红在乙醇中的脱色，应根据染液情况和自来水情况调整冲洗时间；

4. 4. 脱水时，应控制切片在低浓度乙醇的时间，低浓度乙醇对伊红有洗脱作用；

5. 5. 根据不同苏木素，是否需要分化反蓝，以及分化反蓝的时间均不相同，水溶或淳溶的伊红着色效果也不相同，在染色过程中进行镜检能达到更好的染色效果；

6. 6. 中性树胶固封剂浓度要适中，浓度高时，不易散开、易产生气泡，浓度低时，易溢出切片、待二甲1苯挥发后树胶易分布不均产生空泡；

7. 7. 染色应在通风橱进行，避免或减少试剂对人体的伤害。

 

• - 二甲1苯3缸，浸染5min；

• - 无水乙醇2缸，浸染2min；

• - 75%，85%，95%梯度乙醇各1缸，浸染1min；

• - 自来水浸1min；

• - 苏木素浸染5-8min；

• - 自来水冲洗；

• - 分化：根据分化液不同，数秒或数分钟不等；

• - 自来水冲洗；

• - 反蓝：根据返蓝液不同，数秒或数分钟不等；

• - 自来水冲洗；

• - 伊红浸染1-5min；

• - 自来水冲洗；

• - 75%、85%、95%梯度乙醇各1缸，浸染10-20s；

• - 无水乙醇2缸，浸染1-2min；

• - 二甲1苯2缸，浸染2min；

• - 中性树胶固封。

 

• - 组织完整；

• - 厚薄均匀；

• - 染色清晰，对比度高；

• - 无明显褶皱、破损、刀痕、裂隙等；

• - 着色无污染；

• - 固封适中，无气泡、空腔，透明度好。

  染色过程中切片脱落

• ● 组织本身如凝血块、血栓、分泌物等，干涸或过硬的组织及组织破碎等，染色时易脱落。可尝试使用防脱片；

• ● 组织脱水、透明不佳，石蜡未完全浸透，组织较软，切片脱蜡时收缩，染色时又膨胀，进而易脱片。可尝试重新脱水；

• ● 组织脱水浸蜡时间过长或温度过高，组织过硬、过脆，切片时不易完整，且易脱片。可尝试在切面敷乙醇或乙醇甘油后切片。

 切片染色不均

• ● 组织固定不当，固定好的部位着色清晰，未固定好的部分着色模糊；

• ● 组织脱水不佳，部分组织内含水，导致浸蜡不充分，造成部分染色出现灰染可尝试重新脱水；

• ● 切片薄厚不均或有横纹；

• ● 切片脱蜡不充分，含蜡部分着色浅或不着色；

• ● 切片上有气泡，导致与染液接触不充分。

 染色片有污染

• ● 展片台，水面有杂质或碎屑；

• ● 切片机刀头有组织碎屑或杂质，易粘黏到蜡带上；

• ● 染色液中有污染、碎屑、色素颗粒、沉渣等。

 

 

  

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