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【文献速递】全球首-个单基因敲除通用型CAR-T细胞疗法临床突破
495 人阅读发布时间：2025-08-29 10:12
2025年8月21日，北京大学魏文胜团队、解放军总医院韩为东团队联合博雅辑因在 Cell 发表题为 “Glycan shielding enables TCR-sufficient allogeneic CAR-T therapy” 的研究成果。团队通过全基因组CRISPR筛选鉴定出糖基化调控基因 SPPL3，并提出“糖盾护体”策略：在供体T细胞中敲除SPPL3并导入抗CD19 CAR，可在细胞表面形成致密糖基化修饰层，从而实现三重免疫保护——降低HLA-I分子暴露以削弱宿主T细胞识别、下调NK细胞活化配体以抵御NK细胞杀伤、抑制Fas/FasL途径以避免细胞死亡。研究表明，这一改造并未影响CAR-T的抗肿瘤效能，而是显著增强了免疫耐受性和体内持久性，为TCR保留型异体CAR-T疗法提供了全新工程化思路，有望突破免疫排斥与GvHD的临床难题。
通用型CAR-T 细胞疗法突破了物流运输、规模化生产、产品质量控制以及患者适用性方面的局限，但该策略仍面临严峻挑战，包括宿主抗移植物（HvG）免疫排斥、体内持续存活能力有限以及移植物抗宿主病（GvHD）的发生风险。为此，研究团队采用无偏倚的全基因组CRISPR高通量筛选，系统解析影响异体T细胞持久性的关键基因及调控网络。筛选策略涵盖三个维度：（1）降低HLA-ABC的可检测性，从而削弱TCR介导的识别与清除；（2）增强对NK细胞杀伤的抵抗力；（3）提升长期存活性，尤其是抵御FasL诱导的凋亡。经过多重条件下的筛选与富集分析，最终锁定了同一个关键调控因子——SPPL3。在后续功能验证中，细胞杀伤实验显示，SPPL3敲除（SPPL3 KO）的T细胞不仅能抵御同种异体T细胞（以TCR-T模型模拟）的攻击，同时也表现出对NK细胞杀伤的显著抵抗力。
Figure 1. Genome-wide CRISPR-Cas9 screens in human T cells
SPPL3 是一种定位于高尔基体的裂解酶，可通过抑制糖基转移酶活性及糖基化过程来调控细胞表面的糖基修饰。研究团队利用质谱开展糖蛋白质组学分析发现，敲除SPPL3后，T细胞表面与免疫识别相关的受体出现高度糖基化修饰，形成类似“糖盾”的结构。这一变化使T细胞获得“隐身”能力，能够在宿主体内规避免疫排斥，长期存活且不引发GvHD。值得注意的是，仅通过SPPL3单基因敲除即可实现对抗HvG，同时避免GvHD，无需额外进行TCR基因编辑。进一步分析显示，SPPL3缺失并不影响anti-CD19 CAR分子的检测和表达，却会降低T细胞表面TCR的可检测性。此前，韩为东团队也发现，SPPL3缺失的肿瘤细胞能够改变细胞表面配体与免疫细胞的互作模式，借助“糖盾”机制成功逃避免疫清除。
Figure 2. The detection of glycans on primary T cells
研究团队先后开展了两项IIT临床试验。第一项试验采用TCR与SPPL3双敲除策略，结果显示在安全性方面未出现 GvHD，但 CAR-T 在体内的持续时间有限，通过对输入产品中残存CD3+ CAR-T的扩增动力学分析，研究者推测SPPL3敲除所形成的“糖苷盾”能够避免GvHD，而保留TCR基底信号则可能对维持T细胞长期存活至关重要。基于这一假设，团队进一步开展了仅敲除SPPL3、保留TCR的第二项临床试验。结果显示，患者体内的CAR-T可持续存在6个月以上，未观察到典型GvHD或严重免疫并发症，部分患者获得持久缓解。
Figure 3. Long persistence of SPPL3KO/anti-CD19 CAR-T cells in vivo
这一结果首次证明：SPPL3缺失诱导的糖基化重塑能够突破异体CAR-T的免疫屏障，而内源性TCR信号对细胞持久性具有不可替代的作用。该发现为通用型CAR-T的设计与开发提供了全新的策略范式。
在本研究中，所使用的Monoclonal Anti-FMC63 Antibody（Cat. No. FM3-Y45）由 ACROBiosystems百普赛斯提供，为全球首-个单基因敲除的通用型CAR-T细胞疗法研究提供了关键支持。该抗体能够特异性识别FMC63 scFv抗原结合位点，属于高灵敏度、高特异性的抗独特型抗体，可用于精准检测 Anti-CD19 (FMC63) CAR 的表达水平。通过这一工具，研究团队得以对CAR-T细胞的构建和功能进行可靠评估，凸显了ACROBiosystems在通用型CAR-T疗法研发中的重要保障作用。
✏️ Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (Cat. No. FM3-Y45)
2e5 of anti-CD19 CAR-293 cells were stained with 100 μL of 1:50 dilution (2 μL stock solution in 100 μL FACS buffer) of Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (Cat. No. FM3-Y45) and Isotype control antibody respectively. PE signal was used to evaluate the binding activity.
Non-specificity of Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (Cat. No. FM3-Y45) binding to CD3+ cells present in human PBMC. Human PBMCs were simultaneously stained with FITC-labeled anti-CD3 antibody and Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (2 μL of the antibody stock solution corresponds to labeling of 5e5 cells in a final volume of 100 µL), washed and then analyzed with FACS. Both FITC and PE positive signals was used to evaluate the non-specific binding activity to human CD3+ cells.
✏️ FITC-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (Cat. No. FM3-FY45)
2e5 of Anti-CD19 CAR-293 cells were stained with 100 μL of 1:50 dilution (2 μL stock solution in 100 μL FACS buffer) FITC-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (Cat. No. FM3-FY45) and isotype control respectively. FITC signal was used to evaluate the binding activity.
Non-specificity of FITC-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (Cat. No. FM3-FY45) binding to CD3+ cells present in human PBMC. Human PBMCs were simultaneously stained with PE-labeled anti-CD3 antibody and FITC-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (2 μL of the antibody stock solution corresponds to labeling of 5e5 cells in a final volume of 100 µL), washed and then analyzed with FACS. Both PE and FITC positive signals was used to evaluate the non-specific binding activity to human CD3+ cells.
| 货号 | 产品名称 |
|
FM3-Y45 |
Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) |
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FM3-FY45 |
FITC-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) |
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FM3-AY54P1 |
APC-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (Site-specific conjugation) |
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FM3-HPY53 |
PE-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (Site-specific conjugation) (Preservative free) |
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FM3-AM534 |
Alexa Fluor™ 647-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45)Star Staining |
|
FM3-AFM721 |
APC-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Rabbit IgG (1G10) (0.03% Proclin) |
|
FM3-PFM721 |
PE-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Rabbit IgG (1G10) (0.03% Proclin) |
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本文学术内容参考: 北京大学生物医学前沿创新中心公众号、博雅辑因公众号以及文献Glycan shielding enables TCR-sufficient allogeneic CAR-T therapy。
ACROBiosystems
inquiry@acrobiosystems.com
15117918562
（备注：姓名+公司）