同样的抗体，为什么不同FcγR-CR T细胞疗效不同？

传统CAR-T通常利用scFv直接识别肿瘤相关抗原，因此，当治疗靶点发生变化时，往往需要重新设计CAR结构。

不同于传统CAR-T直接识别抗原，FcγR-CR T采用了另一种设计思路。研究人员将Fcγ受体作为胞外识别结构域，使工程化T细胞不再直接识别肿瘤抗原，而是通过结合治疗性抗体Fc区域完成靶细胞识别。当抗体首先结合肿瘤细胞表面抗原后，其Fc区域进一步与FcγR结合，诱导T细胞活化并介导细胞毒作用。

图1 Fcγ受体驱动的嵌合受体T细胞介导的肿瘤细胞毒性

研究显示，这种设计具有一定的模块化特点。由于FcγR-CR T细胞识别的是抗体Fc区域，因此理论上可通过更换不同治疗性抗体实现对不同肿瘤抗原的识别，而无需针对每个靶点重新构建CAR。然而，这种设计也引出了新的问题。由于T细胞激活依赖FcγR与抗体Fc之间的相互作用，因此FcγR本身的结构特征，尤其是不同受体亚型及天然多态性，可能成为影响FcγR-CR T功能的重要变量。

图2 Fcγ 受体嵌合受体（FcγR-CR）模块化分子结构

目前，多数FcγR-CR研究采用CD16a作为胞外识别结构域。CD16a能够结合IgG抗体Fc区域，并介导抗体依赖的免疫效应，因此，其与抗体Fc之间的结合能力可能影响FcγR-CR T细胞的激活水平。

研究显示，CD16a在人群中天然存在158位点遗传多态性，仅一个氨基酸差异即可形成CD16a-158V和CD16a-158F两种变体。实验结果显示，与CD16a-158F相比，CD16a-158V对IgG1和IgG3具有更高的结合能力。

这也成为FcγR-CR T设计中的一个核心问题：天然存在的亲和力差异，是否会进一步影响FcγR-CR T细胞的抗肿瘤活性？

虽然已有研究显示，CD16a-158V具有更高的IgG结合能力，但这一差异是否能够转化为FcγR-CR T细胞更强的抗肿瘤功能，仍需要实验验证。

为此，Arriga等人在对比不同FcγR变体（如CD16a和CD32a）的遗传多态性对治疗效果的影响时，选择了KRAS突变的HCT116结直肠癌模型开展研究。研究指出，由于KRAS突变可持续激活EGFR下游信号，西妥昔单抗单药治疗效果受到限制，因此选择HCT116模型评价FcγR-CR T细胞联合西妥昔单抗后的抗肿瘤活性。在此基础上，研究者比较了表达CD16a-158V和CD16a-158F两种变体的FcγR-CR T细胞，在西妥昔单抗介导下的功能差异。研究结果显示，在西妥昔单抗存在的条件下，表达CD16a-158V的FcγR-CR T细胞可产生更高水平的IFN-γ和TNF-α，而表达CD16a-158F的FcγR-CR T细胞细胞因子释放水平相对较低。

作者随后进一步在CB17-SCID小鼠HCT116异种移植模型中进行了验证。研究显示，西妥昔单抗联合CD16a-158V-CR T细胞能够抑制肿瘤生长，而联合表达CD16a-158F变体的FcγR-CR T细胞则未观察到相同程度的抑瘤效果。

基于上述结果，作者认为，CD16a天然多态性可能影响FcγR-CR T细胞对抗体介导信号的响应能力，并进一步影响其体内外抗肿瘤活性。

上述实验结果提示，更高的Fc结合能力可能带来更强的抗肿瘤活性。那么，这一差异是如何产生的？文献指出，当抗体Fc区域与FcγR结合并诱导受体聚集后，可激活胞内信号并促进T细胞发挥细胞毒作用。其主要效应机制包括穿孔素/颗粒酶介导的颗粒依赖性杀伤以及Fas-FasL等非颗粒依赖性途径。作者同时总结了CD16a、CD32a和CD64等不同FcγR在FcγR-CR T体系中的应用特点。

图3 FcγR-CR T 细胞肿瘤模型临床前研究汇总

上述研究涉及多种FcγR亚型及天然变体的比较分析，也进一步体现了标准化FcγR研究工具的重要性。

The purity of Human CD16a (V176), His Tag (Cat. No. CD8-H52H4) is more than 95% and the molecular weight of this protein is around 35-45 kDa verified by SEC-MALS.

• CD16a (F176) 与Rituximab biosimilar亲和力经SPR验证

Human CD16a (F176), His Tag (Cat. No. CDA-H5220) captured on CM5 chip via anti-His antibody can bind Rituximab biosimilar (Cat. No. CD0-M36) with an affinity constant of 1.18 µM as determined in a SPR assay (Biacore 8K) (QC tested).

• CD32a (H167) 与Rituximab亲和力经SPR验证

Rituximab immobilized on CM5 Chip can bind Human CD32a (H167), His Tag (Cat. No. CD1-H5223) with an affinity constant of 0.882 μM as determined in SPR assay (Biacore 8K) (Routinely tested).

• CD64结合检测试剂盒用于与FcγRI结合效力评估

The kit (Cat.No.FRT-03) has been used to detect four FDA approved antibody drugs with different affinities binding to human CD64. Bevacizumab, Toripalimab, and Efgartigimod alfa bind to human CD64 with the nanomolar affinity. The Fc of Eculizumab has been modified into the human IgG2 hinge region and human IgG4 CH2-CH3 region, so it doesn’t bind to human CD64.

• ADCC活性评估（ADCC功能细胞株）

Human CD16a (158V) (Luc) Jurkat Reporter Cell Development Service (Cat.No. SCJUR-STF067)

• ADCP活性评估（ADCP功能细胞株）

Human CD32a (131H) (Luc) Jurkat Reporter Cell Development Service (Cat.No. SCJUR-STF069)