更懂您应用的功能细胞株 | 适配抗药抗体（ADA）检测场景

单抗、融合蛋白等治疗性蛋白在发挥疗效的同时，常会触发机体免疫应答，产生抗药抗体（Anti-Drug Antibody, ADA）。ADA可中和药物活性、降低体内药物暴露，导致疗效下降乃至治疗失效；也可能引发输注反应、过敏等安全性事件。在抗体药临床免疫原性评估与长期用药监测阶段，需要快速判别ADA尤其是中和型抗药抗体（nADA）是否削弱药物药效，为疗效丧失（LOR）预警、给药策略优化与免疫原性应对提供核心实验数据。

FDA在2014年《治疗性蛋白产品免疫原性评估》指南中明确要求，对治疗性蛋白产品采用风险导向评估策略，在非临床与临床阶段系统评估、管控免疫原性风险，ADA 检测，正是免疫原性风险防控的核心环节。FDA指南同样将中和活性分析纳入ADA完整分析体系，并强调检测方案的设计应匹配药物MOA。

当前主流ADA检测为免疫分析方法包括：酶联免疫法（ELISA）、电化学发光法（ECL）、表面等离子共振法（SPR）及放射性免疫法（RIA）。这类方法解决了ADA是否结合药物，但却无法判断ADA是否真正的抑制药物功能。

想要评估 ADA 对药物药效的实际影响，需要回到药物作用机制（MOA）：借助匹配药物MOA的报告基因细胞株，将药物-靶点互作的下游生物学效应转化为可读检测信号，完成从“抗原-抗体结合（Binding）检测”到“中和活性（Neutralization）评价”。

ACROBiosystems百普赛斯基于荧光素酶报告基因系统构建一系列MOA明确的报告基因细胞株，提供可量化的细胞水平功能评价工具，补齐传统免疫分析“仅可观测结合，无法判定中和活性”的局限。

依托报告基因细胞株，仅需三步实验即可建立灵敏、可靠的中和型ADA（nADA）检测：

应用案例所使用产品：

VEGF165蛋白与细胞表面的VEGF R2受体结合，激活下游NFAT信号通路，驱动荧光素酶（Luciferase）报告基因表达，产生发光信号。抗原浓度越高，信号越强。

 

实验结果：梯度稀释Human VEGF165蛋白和Human VEGF R2 (Luc) HEK293报告基因细胞株共孵育，梯度刺激测定 RLU，确定抗原实验工作浓度为EC50=10.47ng/mL。

实验结果：使用第一步确定的Human VEGF165 蛋白（10.47ng/mL），梯度稀释Bevacizumab与Human VEGF R2 (Luc) HEK293报告基因细胞株共孵育，通过读取RLU值确定Bevacizumab后续用于检测ADA的工作浓度为EC50=0.06299μg/mL。

实验结果：梯度稀释抗Bevacizumab抗体模拟ADA阳性样本，在第二步Bevacizumab浓度为0.06299μg/mL条件下开展检测；测得模拟ADA EC50=0.5777 μg/mL，最大中和率>100%，可定量表征 ADA 功能性水平。

Bioactivity detection of Anti-Bevacizumab antibody

本期案例完整拆解三步法nADA检测流程，印证了ACROBiosystems百普赛斯报告基因细胞株可直接表征 ADA 对药物的中和活性，可实现高灵敏度检测水平、检测数据可量化、实验操作简便、体系可复用。

后续我们将持续输出更多药物研发场景的功能细胞株应用案例，

给大家分享产品推荐、标准化实验方法和真实实验数据。

参考资料：