GMP级APOE3：解锁LNP-mRNA细胞治疗的关键钥匙

2024-2026年间，石药集团SYS6020注射液相继获得多发性骨髓瘤、系统性红斑狼疮、重症肌无力三项适应症临床批件，成为全球首-个进入临床的基于mRNA-LNP的ex vivo CAR-T产品。这一里程碑标志着LNP-mRNA技术路线在细胞治疗领域获得了监管层面的实质性认可。然而，LNP-mRNA递送系统面临一个关键问题：LNP如何高效进入目标细胞？

LNP（脂质纳米颗粒）由可电离阳离子脂质、磷脂、胆固醇和PEG-脂质四种组分自组装形成，功能类似“分子快递车”——包裹并保护mRNA，将其递送至细胞内部。但细胞膜表面有天然的屏障，带负电荷的LNP与同样带负电荷的细胞膜之间存在静电排斥。因此，LNP若要进入细胞，就必须先获得一把突破屏障的“钥匙”。

ApoE（载脂蛋白E）正是这把关键钥匙，它是一种血浆脂蛋白，存在E2、E3、E4三种主要亚型，可由巨噬细胞、平滑肌细胞等多种细胞分泌，高浓度存在于组织间液中。三种亚型因第112位和第158位氨基酸残基的差异而功能各异：

ApoE的作用机制分为三步：LNP表面吸附ApoE蛋白形成复合物；复合物被细胞膜表面的低密度脂蛋白受体（LDLR）识别；触发内吞途径，LNP进入细胞并释放mRNA。

一项发表于Molecular Therapy的头对头研究明确指出：使用LNP进行T细胞mRNA递送时，CAR表达只有在添加APOE后才能检测到。研究者采用GenVoy-ILM™ T细胞试剂盒，在没有APOE补充的情况下，LNP几乎无法转染T细胞。这意味着APOE是LNP进入T细胞的“刚需”。

Figure 1. Dot plots of human primary T cells, 2 days after addition of APOE or not.

与此同时，一篇发表于International Journal of Pharmaceutics的研究显示，在人单核来源树突状细胞中，添加APOE后LNP递送效率显著提升——8μg eGFP mRNA剂量下实现了约70%eGFP阳性细胞，ΔMFI和阳性率均提升至少2倍。后续优化研究更实现剂量突破：在APOE辅助下，SM-102 LNP+N1MePsU修饰mRNA的组合，最低仅需0.1μg/10⁶细胞即可实现90%以上转染率。

Figure 2. LNP-mediated delivery was increased by apolipoprotein E4 addition but was inferior to EP.

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随着更多企业跟进这一技术路径，高质量的GMP级APOE蛋白不仅仅是原料供应，更是为整个LNP-mRNA细胞治疗生态提供关键基础设施。ACROBiosystems百普赛斯积极响应市场需求，开发出了高质量重组Apolipoprotein E（ApoE）系列蛋白，涵盖ApoE3等主要亚型，最-新上线的GMP Human Apolipoprotein E / APOE3 Protein（Cat. No.  GMP-APEH35）经严格质控，具有完整翻译后修饰和天然构象，可应用于LNP配方优化、ApoE-LDLR结合实验、体外转染体系开发及体内研究等场景，助力LNP-mRNA与CAR-T疗法从机制研究走向临床转化。

实验数据进一步证实了APOE3的增效作用：APOE3显著提高T细胞中LNP介导的转染效率

采用CD4（Cat. No. MBS-S004）和CD8（Cat. No. MBS-S005）NanoSort磁珠分选纯化T细胞，使用T细胞活化/扩增CD3/CD28磁珠（Cat. No. GMP-MBS001）激活24小时后，以1×10⁵细胞/孔接种，分别用1 μg/mL LNP联合0.1 μg/mL或0.5 μg/mL GMP级人源APOE3蛋白（Cat. No. GMP-APEH35）处理。在37 °C、5% CO₂条件下孵育6小时或21小时后收集细胞，通过流式细胞术检测GFP荧光强度，并以7-AAD染色评估细胞活力。结果显示，与单独LNP处理相比，联合APOE3显著提高了GFP阳性细胞比例（图A、B、C）和平均荧光强度（MFI）（图D），而各组间细胞活力无显著差异（图E）。数据以均值±标准差表示（n=3）。

• 使用LNP：DLin-MC3-DMA（简称MC3）的验证数据

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参考文献